(ج) الأدينين المتزامن ويمكنك تعديل السيتوزين بواسطة محرر أقدام CRISPR ثنائي الدياميناز. (هـ) برنامج تجاوز الإكسون ويمكنك (و) استعادة mRNA كامل الطول بسبب قواعد الحمض النووي للعنوان المتحور في مواقع مستقبلات الوصل هذه. (ز) إثراء الأنسجة المعدلة بالقاعدة من الأنسجة غير المحررة التي تعمل مع Cas9 منتج قابل للتحريض حاد بنفس sgRNA مثل ناشر القاعدة. (أ) إدخال SNP خارجي باستخدام CRISPR / Cas9 مع أوليجونوكليوتيد مانح أحادي السلسلة (ssODN) أو شظايا PCR خطية عالية من dsDNA. (ب) إدخال SNP داخلي باستخدام Cas9-Jewel أو Cas9-CtIP أو Cas9-DN1S بالإضافة إلى ssODN قصير أو شظية PCR خطية من dsDNA.

ما هي العيوب بعيدا عن الجرذان القاضية؟

• في جولة واحدة، تمكن اللاعب من إرسال كرة سريعة إلى فيلادلفيا في الشوط السادس، في حين عانى شويلينباخ من بعض الأخطاء في BABIP.
• داخل حوالي ثلاثة اختبارات منفصلة، قمت بالصعق الكهربائي لمجموعة الهواتف الجديدة K562 BCR/ABL التي تحتوي على SDE-hABL-step 1 وIe-hABL-1sgRNA.
• على سبيل المثال، يتم استخدام مؤيد CMV للحصول على عبارة الجين القابل للتحديد.
• سنتحدث بشكل نقدي عن التطبيقات وسنذكر إيجابيات وسلبيات كل طريقة.

بالمقارنة مع الطرق المعتمدة على التماثل للكشف عن التعديلات في موقع انقسام Cas9 ذي العشرة قواعد، يُنتج المحرر الأساسي أيضًا طفرات نقطية من نطاقات أكبر من 29 قاعدة في موقع Cas9n الممسوح.176 لذلك، يُقدم المحرر الأساسي تركيزًا أفضل على الاعتماد على الذات مقارنةً بالطرق المعتمدة على التماثل. أولًا، يسمح التحرير الأمثل بتصحيح جميع أنواع الاستبدالات، مثل التغييرات والتحويلات، بالإضافة إلى عمليات الإدخال والحذف الصغيرة، بدلاً من الحاجة إلى إجازات مزدوجة السلسلة أو قوالب إصلاح الحمض النووي للمتبرع الخارجي.177،178. قد يُكمل التعديل الأساسي أيضًا تعديل القدم في حالة تعديلات المتفرج غير المرغوب فيها في الكشف عن العديد من أساسيات السيتيدين أو الأدينين داخل نافذة تعديل محررات القدم.176

تقنيات لتحسين تحرير الجينوم بوساطة CRISPR-Cas9 المستند إلى HDR

نعتقد أن الإضافة الجديدة لعنصر CoTC لا تتجنب فقط الفئة العمرية من الأليلات ناقصة الشكل، بل يمكنها أيضًا زيادة المصطلح الجديد للصحفي بسبب زيادة معالجة ما قبل mRNA وتقصير تدمير RNA38. إذا كنتَ فئرانًا معدلة وراثيًا قديمة وتم إنتاج فئران معدلة وراثيًا لإنتاج بروتينات ممتازة، فستُقرأ العديد من الاقتراحات من خلال إزالة جين و/أو حذف اسم موقع وظيفي للبروتين الضروري. يتم تحقيق ذلك عن طريق الطفرات العشوائية التي تتفاعل مع المركبات الكيميائية أو أسلوب مصيدة الجينات، أو عن طريق استهداف الجينات لإنتاج فأر معدل وراثيًا جيدًا. تسمح إعادة التركيب المتماثل للأخصائي بفقد إكسون واحد أو أكثر من الجين تمامًا (انظر الشكل 2)، مما يؤدي إلى إنتاج بروتين متحور أو مقطوع، أو في أغلب الأحيان، صفر بروتين ضروري. تم التحقق من التعبير الجيني الأجنبي الجديد للموقع المقصود من خلال تأكيد عبارة البروتين الضرورية الجديدة من GLuc (الشكل الإضافي 5) وحساب نشاط لوسيفيراز الجديد (الشكل 5).

أجندة مسعى الملاكمة

حقق فريق بريفز الجديد فوزًا جيدًا بنتيجة 2-0، إلا أنهم لم يستغلوا الفرص الكبيرة التي سنحت لهم حتى الآن، وكانوا على وشك الهزيمة أمام فيلادلفيا، حتى مع بروز شويلينباخ. بعد تمريرة واحدة، تمكن شويلينباخ من العودة سريعًا إلى فيلادلفيا في اليوم السادس، حيث عانى شويلينباخ من معدل BABIP سيء للغاية. كانت البداية جيدة، بينما أمضى شويلينباخ بعض الوقت في محاولة صد كرة إيلي لايت المتحمس التي أخطأت في التمرير مرتين في وسط الملعب، والتي أدت إلى ضربتين قاضيتين، لينتهي اللقاء بفوز رائع بدون أهداف.

أثناء وجودك في بنية sgRNA، يجب أن تأخذ في الاعتبار النسخ الناتجة عن عنوانك (اللوحة أ). يهدف sgRNA الخاص به إلى معالجة إكسون نشط مشترك لجميع متغيرات الوصل للجين المستهدف. في المثال أعلاه، بالنسبة للأشخاص الذين ينتجون إندل نشط في الإكسون 2، فإنك تحصل على المصطلح من الشكل المتساوي رقم 2، وبالتالي لن تحصل على خلل كامل في الجين (اللوحة ب). ومع ذلك، يرتبط اختبار الخلل الناجح بالبنية الحذرة، وقد تصل إلى أعلى نشاط في العنوان مع تقليل تأثيرات خارج العنوان.

استخدم إيكيدا وآخرون هذه العملية لإنتاج طفرات خالية من الندوب في الأنسجة الجذعية متعددة القدرات. وقد مكّنت هذه العملية خلايا العضلات باستخدام الفاصوليا المغناطيسية من فرز الخلايا التي تحتوي على أجسام مضادة نشطة لـ CD19. بالإضافة إلى ذلك، مكّن مستوى التعبير الجيني لـ mCherry من عزل الأنسجة المعدلة ثنائيًا باستخدام FACS. طالما أن كلا الإجراءين التعديليين فعالان ولا tusk casino تسجيل الدخول عمان يتسببان في حدوث طفرات غير مرغوب فيها، يمكن لهذه التقنية إنتاج أنسجة يمكن تعديلها فقط من خلال GOI. ومع ذلك، فإن الحاجة إلى بعض الإجراءات تقلل من إنتاج الخلايا المعدلة بشكل صحيح وقد تزيد من الوقت اللازم لنموها. في الوقت نفسه، من الممكن التخلص من التعبير الجيني للعلامة القابلة للاختيار في الخطوة الثانية عن طريق الحذف بدلاً من التعديل المباشر، على الرغم من أن هذا لم يحدث في الأمثلة الجديدة المعروضة.

يُحسّن أدينين وسايتوسين بيس إيديتينغ مضاد حيوي لفحص المعارضة الصحفي (ACBE-ARSR) 72 الأداء مقارنةً بـ ABE وCBE بمقدار 1.9 و4.6 فليكس على التوالي، مما يُحقق كفاءة تحرير تصل إلى 90%. يُعدّ PEAR (مُراسل اهتمام الناشر المثالي) أداة فلورية جيدة لتحديد الخلايا الفردية التي تتمتع بأفضل حالات التحرير، ويمكن أن يزيد أداؤه من عدد الخلايا المُحرّرة بنسبة 84% تقريبًا. بما أن الخلايا المُعدّلة بتقنية CRISPR تُشكّل نسبة ضئيلة من الأفراد، فكيف يُمكننا تحديدها وتنميتها وتمييزها؟

لهذا السبب، لا يُمكن أن يُؤدي تعطيل الجين الدائم إلى إنتاج سلالة فأر مُعطّلة وراثيًا صالحة للدراسة. يسمح التعديل الجيني المشروط باستخدام تقنيتي Cre-lox وFlp-frt بتعطيل الجين الجديد في مجموعة فرعية فقط من الهياكل، أو في وقت مُحدد، مما يُجنّب الوفاة. في حين أن استهداف الجينات قد يُنظّم مكانيًا وزمانيًا، يُمكن تحليل وظيفة جين مُعيّن بناءً على إصدارات الهواتف المطلوبة ونقطة خروج مُحددة.

عندما تلعب الروبوتات الذكية بكرة السلة، هل يمكن أن يظل عنوانها "لعبة الفيديو الجميلة"؟

تم تربيتها في خمسة أجنة تحتوي على نسب عالية من الخلايا المُعلنة لجين mTagBFP2 حتى مرحلة البلوغ، وتم تهجينها مع أسماك من النوع البري. نقل أحدها بنجاح التركيبة المُركزة حديثًا إلى الأسماك الصغيرة، مما أدى إلى تكوين سلالة مستقرة (25%) (الجدول 1). أُدخلت أسماك F2 متغايرة الزيجوت معها، وخضعت الأجنة لتحليل ميثيل سلولوز ألفا-1% في 24 ساعة من HPF20. كانت الأجنة من النوع البري والمتغايرة الزيجوت طبيعية ظاهريًا بعد علاج تحليل ميثيل سلولوز؛ ومع ذلك، أظهرت الطفرات متماثلة الزيجوت أن الخلايا المكسورة تُنسخ النمط الظاهري للطفرة الجديدة في جين bag3 (الشكل 2د). أظهرت دراسة QRT-PCR أن نسخة bag3 مفقودة في متماثلات الزيجوت في جين bag3mTagBFP2 (الشكل 2هـ).

كما هو الحال مع جينات عائلة TYR وAtm، أُجريت حوالي ثلاثة اختبارات كهرومغناطيسية فردية على أنسجة K562، حيث تم استنساخ كل sgRNA موجه إلى إكسون ABL الأول (SDE-hABL-1sgRNA وInternet Explorer-hABL-1sgRNA) داخل ناقل التعبير الثديي CRISPR-Cas9-GFP. أظهر تسلسل سانجر تحريرًا للجينوم في مرحلة الانقسام المطلوبة لكل مجموعة sgRNA، وتنبأت دراسة Wave بمجموعة متنوعة من عمليات الحذف والإدراج السريعة لكل مجموعة (الشكلان 2 والخطوة 3). أظهر تحليل NGS أكثر تغيرات الأليل شيوعًا في K562 من الكهرومغناطيسية التي تحتوي على sgRNA من الخطوة 1 في كل من SDE وInternet Explorer-hABL (الجدول S8). 40% (4/10) من الاختلافات الأليلية الناتجة عن sgRNA من النوع Ie-hABL-step 1 زادت في الطفرات داخل الجسم. في المقابل، زادت sgRNA من النوع SDE-hABL-1 بنسبة 100% (9/9) من تسلسلات الحذف، حيث كانت 5% (42.4%) في الطفرات داخل الجسم، ولكن مع تتابع ربط قياسي متغير (S8 Table).

لكن، إذا كان الجين المُهمّ مهمًا، فسيكون التعطيل الحقيقي خطيرًا على الأرجح، وستحتاج بدلًا من ذلك إلى إجراء تعطيل مشروط. تمت مراجعة أفضل 5 أهداف مُتوقعة من اختبار انقسام عدم تطابق نوكلياز T7 (T7EI) وفقًا لعلامات الشركة المُصنِّعة (تقنية الحمض النووي المُتكاملة) 28. تم تضخيم تسلسلات الحمض النووي المُرادفة بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) باستخدام أوليجونوكليوتيدات مُحددة (الجدول S12). لإنتاج أحدث مُركبات مُغايرة مزدوجة، تم تحريف جزيئات تفاعل البوليميراز المتسلسل إلى 95 درجة مئوية لمدة 10 دقائق، متبوعةً بارتفاع درجات الحرارة (95-85 درجة مئوية، -2 درجة مئوية/ثانية، و85-25 درجة مئوية، 0.3 درجة مئوية/ثانية).